引言
CircRNA具有生產成本低、穩定性好、蛋白表達水平高的優勢，同時也對核酸外切酶降解具有高抗性，在免疫細胞治療領域具有重要的應用潛力。T細胞受體（TCR）工程T細胞（TCR-T）是治療病毒感染和癌癥的一種很有前途的手段,與傳統CAR-T相比，抗原識別范圍更廣。這種類型的治療方法在抗病毒與抗腫瘤免疫治療領域具有廣泛的應用前景。
近日，賽分科技客戶上海交通大學醫學院附屬第一人民醫院/上海市第一人民醫院聯合蘇州科銳邁德生物醫藥科技公司在國際學術期刊《Molecular Therapy》在線發表了關于circRNA的研究論文（點擊文末閱讀原文可查詢相關文章）。該研究首次報道了基于circRNA技術的TCR-T細胞療法，為臨床上造血干細胞移植后人巨細胞病毒（CMV）感染提供新的、更為安全有效的免疫治療策略。研究人員使用賽分科技產品SRT SEC-1000（30×300mm）體積排阻色譜柱對circRNA進行純化處理，收率可超過99%，回收后純度高達96%，這種純度水平在TCR-T細胞工程的轉染過程中至關重要。
背景介紹
CircRNA細胞定位準確，調節基因表達能力強，在疫苗和藥物研發領域備受關注。其制備過程中產生的線性RNA雜質可能激發強烈的免疫反應，因此有效去除線性RNA雜質、制備高純度circRNA是開展體內外實驗的必要條件。
體積排阻色譜法（SEC-HPLC）是circRNA純化的有效方式。其優點是容易去除差異較大的RNA片段，比如內含子片段。將SEC-HPLC與RNase R酶消化法相結合，可以擴大circRNA、開環circRNA、線性RNA前體等產物的特性差異，且更具放大潛力，是circRNA大批量純化的首選方案。
文章概述
文章選用賽分科技SRT SEC-1000（30×300mm）體積排阻色譜柱，通過SEC-HPLC與RNase R酶消化法相結合的方式，制備得到純度高達96%的circRNA，可以滿足對于circRNA純度及收率的要求，在mRNA疫苗的開發和核酸藥物治療方面潛力巨大。
circRNA純化
色譜柱：SRT SEC-1000 (30×300mm,5 μm,1000Å)
流動相：無RNase磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)
流速：15 mL/min
通過峰捕獲和濃縮收集高純度的circRNA， 超離心后用無RNase的水代替緩沖液
圖1.GFP標記circRNA表達和純化
圖1顯示了GFP標記的circRNA表達和純化程度。研究人員對目標為1.9Kb的circRNA進行純化處理，與未純化的circRNA（76.8%）相比，采用SRT SEC-1000（30×300mm）體積排阻色譜柱純化后的純度可達96.0%，收率可達99.0%。
圖2.編碼PP65特異性TCR的circRNA純化圖譜
圖2總結了使用SRT SEC-1000（30×300mm）體積排阻色譜柱時編碼PP65特異性TCR的circRNA的純度，經過純化后,純度從58.1%提升為96.6%，收率為98.2%，滿足實驗要求，可用于進一步的體內/體外驗證。
實驗結論
文章通過使用SRT SEC-1000（30×300mm）體積排阻色譜柱，滿足了circRNA的純化制備要求。這種純化方式與新型TCR-T載體相結合，會獲得更安全有效的細胞轉染和蛋白表達，可廣泛用于未來治療領域。
延展閱讀
賽分科技大孔徑色譜柱已廣泛應用于mRNA、circRNA的分析以及高純度樣本制備，可以提供藥物研發、臨床前、臨床、大規模生產的制備柱。賽分科技國內外客戶均有采用體積排阻色譜柱用于mRNA樣品分析及制備，并發表相關研究文獻，部分摘錄文獻可再次瀏覽。
鏈接：點擊以下文章再次閱讀，通過SEC分析、制備mRNA樣品：
《文獻速遞 | 抗SARS-CoV-2和新變異株的環狀RNA疫苗》
《文獻速遞 | 美國藥典委員會發布mRNA疫苗質量分析方案》
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