近日，賽分（美國）科技有限公司的國際合作伙伴美國REGENXBIO公司的研究人員在《Journal of Pharmaceutical Sciences》雜志上發表了題為《Impact of Time Out of Intended Storage and Freeze-thaw Rates on the Stability of Adeno-associated Virus 8 and 9》的文章*（點擊底部左下角“閱讀原文”獲取文章鏈接），介紹了AAV腺病毒載體TOIS和凍融率的穩定性考察結果。文章中提到了賽分科技SRT SEC-1000色譜柱應用于分析AAV中游離DNA和聚體的應用案例。
背景介紹
腺相關病毒（Adreno-Associated Virus, AAV）載體作為一種基因導入系統，具有安全性好，免疫原性低，能感染分裂細胞和非分裂細胞，能介導基因的長期穩定表達等優點，因此在神經系統的體內和體外研究中，受到越來越多的關注和重視。AAV在基因治療方面的發展勢頭越來越大，越來越多的臨床試驗將其用于各種治療。
文章概述
腺相關病毒（Adreno-Associated Virus, AAV）是微小病毒科（Parvoviridae）家族的成員之一。近年越來越多研究AAV作為基因治療的載體，AAV 載體包含一條長達 4.7 kb 的 ssDNA，包含在由 60 種單獨蛋白質組成的二十面體衣殼中。
AAV在制造和儲存過程中的化學和物理降解會導致純度降低和效力喪失。通過設計合理的處方，降低保存溫度，可以減小AAV化學和物理產生的降解，AAV可長期貯存于-60℃條件下，短期可置于2~8℃冰箱中。在生產、標記和臨床使用過程中會發生凍融 （Freeze-thaw，F/T）循環和暴露于室溫和冷藏的情況，需要考察其F/T穩定性。
生物技術新銳REGENXBIO公司，就超出預期儲存時間（time out of intended storage，TOIS）和凍融率對AAV8和AAV9穩定性的影響進行深入的研究。研究人員設計三個不同處方，將低濃度和高濃度的 AAV8 和 AAV9 暴露在五個F/T循環中，在“daisy chain”中TOIS穩定性研究。考察不同配方下，樣品的載體基因組濃度，SEC 峰前含量，DLS 的尺寸分布等指標考察TOIS和凍融率對藥物制劑的影響。結果表明，AAV8 和 AAV9產品質量屬性保持在可接受的范圍內，二者具有適用于制造和臨床操作的穩定性曲線，并具有額外的偏移量。
聚體及游離DNA檢測
聚體及游離DNA檢測：文中提到使用粒徑為5 μm，孔徑為1000 Å的賽分科技SRT SEC-1000分析色譜柱，用于檢測游離DNA以及聚體含量。從分析圖譜中可以看到樣品中的聚體和游離DNA可以實現很好的分離。
據了解，REGENXBIO公司多個AAV載體的項目，均采用賽分科技的SEC系列產品進行分析，并定入質量標準。之前的文獻速遞欄目中，介紹賽分科技客戶賽諾菲在《Human Gene Therapy》發表檢測AAV樣品中全衣殼的方法，其中介紹使用SRT SEC-500作為檢測色譜柱，用于確定空衣殼和完整衣殼相對量。
* Bee JS, Zhang YZ, Phillippi MK, etc. J Pharm Sci. 2022 Jan 7:S0022-3549(22)00004-1. doi: 10.1016/j.xphs.2022.01.002.
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